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      活性試劑盒裝載探針的相關使用說明

      發布時間: 2022-01-19  點擊次數: 138次
        活性試劑盒是一種利用熒光探針進行活性氧檢測的試劑盒。本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜,進入細胞內后,可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜,從而使探針很容易被裝載到細胞內。細胞內的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內活性氧的水平。
       
        活性試劑盒裝載探針對于刺激時間較短,通常為2小時以內的細胞,先裝載探針,后用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞。對于細胞刺激時間較長,通常為6小時以上的細胞,先用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞,后裝載探針。
       
        原位裝載探針:本方法僅適用于貼壁培養細胞。按照1∶1000用無血清培養液稀釋DCFH-DA,使終濃度為10μmol/L。去除細胞培養液,加入適當體積稀釋好的DCFH-DA。加入的體積以能充分蓋住細胞為宜,通常對于六孔板的一個孔加入稀釋好的DCFH-DA不少于1mL。37℃細胞培養箱內孵育20分鐘。用無血清細胞培養液洗滌細胞三次,以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA。通?;钚匝蹶栃詫φ赵诖碳ぜ毎?0~30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。
       
        收集細胞后裝載探針:按照1∶1000用無血清培養液稀釋DCFH-DA,使終濃度為10μmol/L。細胞收集后懸浮于稀釋好的DCFH-DA中,細胞濃度為一百萬至二千萬/mL,37℃細胞培養箱內孵育20分鐘。每隔3~5分鐘顛倒混勻一下,使探針和細胞充分接觸。用無血清細胞培養液洗滌細胞三次,以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA。直接用活性氧陽性對照或自己感興趣的藥物刺激細胞,或把細胞等分成若干份后刺激細胞。通?;钚匝蹶栃詫φ赵诖碳ぜ毎?0~30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。
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